徕卡THUNDER系统展现了一种全新的成像方式，高分辨，快速度，低光毒，易操作！随着对各种生命标本的深入研究，厚组织，类器官，细胞3D培养，甚至模式生物成像都离不开Z-stack的使用。Z-stack其实是Z轴三维层切成像，Z-stack成像后可以很方便地观察标本每个层面的结构，进行三维结构重构，甚至进行三维测量分析等。

下面为大家介绍Z-stack拍摄究竟是如何操作的。

进行Z stack拍摄，首先需要在软件左上方“Acquisition Mode”中选中xyz模式，此时会出现“Z-Stack”下拉选框。多通道拍摄光路设置跟前面一样，然后在某一个通道下面点击live进行图像预览。

此时可通过调焦旋钮调节不同焦面设置焦面范围进行三维断层扫描。

例如，可先调整到焦面，然后先向一边调节至标本虚焦，点击begin设置当前为起始断层。

然后再反向调节调焦旋钮，经过最佳聚焦面直至到标本再次虚焦，设置为end，设定好之后可以看到当前我设定的Z-stack的厚度为10.97微米。

那么这里系统结合硬件参数推荐的是每隔0.5微米拍摄一张图片，总共拍摄23张。另外，我们也可以更改其中的数值，自己定义Z-step size的大小。

同样的，多通道光路和曝光时间设定完成后，我们需要选择THUNDER方法。

那么对于厚组织样品我们选择LVCC方法。

这样全部设定完成后，点击start进行拍摄。图像拍摄完成后，当前显示的即是THUNDER的结果。

我们可通过拉动右边的Z-stack拉条来查看不同焦面的图像。

同样的，我们可点击左上角open projects查看文件。

下图普通宽场的一个效果。

那下面这个是THUNDER的图像，可以看到图像清晰锐利，具有更高的对比度与信噪比。

好啦，这样我们的三维立体图像就拍摄完成啦。

对于得到的图像如何查看并进行测量分析呢？

下一期为您详细介绍。

往期回顾

手把手教你用THUNDER——多通道拍摄篇

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手把手教你用THUNDER——时间序列拍摄篇

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